特征|《细胞》子刊：预测免疫疗效的标志物轮到你了，浆细胞！( 二 ) 标志物|基因|研究|患者|疗效

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三种B细胞特异的基因在bulk-seq中有不错的共表达特性
接着他们通过多重免疫荧光（multiplex IF）实验发现浆细胞的特征基因与肿瘤纯净度无关，因此选取浆细胞作为参考是不受肿瘤纯度影响的。于是研究人员用免疫荧光技术估计了23个NSCLC肿瘤样本中的浆细胞数量，同时利用浆细胞特异的基因表达量也估计了浆细胞的数量，发现这两个结果高度相关，证明在单细胞数据中找到的浆细胞特异的基因在bulk-seq中能很好的代表浆细胞，同时也再一次表明这些基因是浆细胞高度特异基因。
然后研究人员仿照最开始的分组方式，将所有患者先按治疗方案分类，再在每一组内根据上述三组特征基因的表达量分为两组—— 表达量最高的1/3患者定义为高表达，较低的2/3定义为高表达。接着他们比较每个治疗组内，特征基因高表达和低表达患者的OS差异，发现只有免疫治疗组中高表达患者的OS比低表达患者更好（HR=0.63, 95% CI: 0.48-0.83），化疗组则没有类似的相关性。

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只有浆细胞特征基因与NSCLC患者的免疫治疗预后相关
在进一步的验证中，研究者将一些已知的免疫治疗预后相关生物标志物加入模型，发现浆细胞特征基因的高表达，仍然与患者更好的OS有关（HR=0.67, 95% CI: 0.50-0.89）。
将预后指标换成客观缓解率，并按鳞状癌和非鳞状癌区分患者时，肿瘤内浆细胞数量更多的患者也都有更长的中位OS 。而且，浆细胞特征基因高表达的患者中，约有35%在治疗后实现临床获益（定义为完全缓解/部分缓解+疾病稳定≥6个月的患者），而浆细胞较少的患者中这一比例仅为25% 。

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无论鳞状癌还是非鳞状癌，浆细胞特征基因表达量更多的患者预后更好（G）；浆细胞特征基因表达量更高的患者在免疫治疗组中的缓解率更高
以往有研究报道肿瘤内的三级淋巴结构（TLS）中有B细胞的存在，因此研究人员探究了TLS与预后的关系[8] ，首先以伊红染色法计算免疫治疗组和化疗组中出现TLS或者淋巴细胞聚集处（LA）的NSCLC肿瘤样本数量，发现两组间含有TLS或者LA的肿瘤样本数量差异并不显著。
而如果比较每组中有TLS/LA患者与没有TLS/LA患者的生存率，那么有TLS/LA且经过免疫治疗的患者的OS更好（HR=0.60, 95% CI: 0.38-0.94）。根据肿瘤样本是否含有TLS/LA分类时，在有TLS/LA的肿瘤样本中，三种B细胞亚型的数量均出现了增加，表明三种B细胞亚型均富集于TLS/LA 。

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两种治疗方案中含有TLS/LA的肿瘤样本数量没有显著差异（左）；TLS/LA与经过免疫治疗的患者的预后相关（右）
尽管浆细胞产生抗肿瘤免疫效应的机制并不明确，但根据以往发表的研究结果，浆细胞可以产生肿瘤抗原特异性的抗体，起到杀伤肿瘤细胞和补体激活作用[8] ，同时B细胞也可以激活抗原呈递细胞或者表达特定BCR的B细胞本身就有抗原呈递功能，它们可以在耗竭CD8+T细胞被PD-L1抑制剂激活后进一步增强CD8+T细胞的肿瘤杀伤能力[10,11] 。
总的来讲，这项研究整合了两个大规模NSCLC临床试验队列的样本bulk-seq转录组数据，同时结合额外的单细胞数据，证明了肿瘤内浆细胞数量的增加与接受阿替利珠单抗治疗的NSCLC患者出现更好的预后有关，并且这种关联性与CD8+T细胞无关，研究数据将为NSCLC患者临床治疗中的用药提供参考。