分光光度计的使用方法指导( 二 ) _知识百科

双光束分光光度计是指从光源中发出的光经过单色器后被一个旋转的扇形反射镜（即切光器）分为强度相等的两束光，分别通过参比溶液和样品溶液。利用另一个与前一个切光器同步的切光器，使两束光在不同时间交替地照在同一个检测器上，通过一个同步信号发生器对来自两个光束的信号加以比较，并将两信号的比值经对数变换后转换为相应的吸光度值。
常用的双光束紫外一可见分光光度计有710型、730型、760MC型、760CRT型、日本岛津UV一210型等。这类仪器的特点是：能连续改变波长，自动地比较样品及参比溶液的透光强度，自动消除光源强度变化所引起的误差。对于必须在较宽的波长范围内获得复杂的吸收光谱曲线的分析，此类仪器极为合适。
双波长分光光度计与单波长分光光度计的主要区别在于采用双单色器，以同时得到两束波长不同的单色光。光源发出的光分成两束，分别经两个可以自由转动的光栅单色器，得到两束具有不同波长A1和A2的单色光。借切光器，使两束光以一定的时间问隔交替照射到装有试液的吸收池上，由检测器显示出试液在波长λ1和λ2的透射比差值△r或吸光度差值△A ，则
△A＝Aλ1－Aλ2＝﹙Eλ1－Eλ2）bc
由式可知， △A与吸光物质c成正比。这就是双波长分光光度进行定量分析的理论根据。
常用的双光束分光光度计有国产wFZ800S、日本岛津UV一300、UV一365等。
这类仪器的特点是：不用参比溶液，只用一个待测溶液，因此可以消除背景吸收干扰，包括待测溶液与参比溶液组成的不同及吸收液厚度的差异的影响，提高了测量的准确度。它特别适合混合物和浑浊样品的定量分析，可进行导数光谱分析等。其不足之处是价格昂贵。