分光光度计的基本工作原理是基于物质对光(对光的波长)的吸收具有选择性 , 不同的物质都有各自的吸收光带 , 所以 , 当光色散后的光谱通过某一溶液时 , 其中某些波长的光线就会被溶液吸收 。 在一定的波长下 , 溶液中物质的浓度与光能量减弱的程度有一定的比例关系 , 即符合比尔定律 。
分光光度计的构造
分光光度计允许的测定波长范围在360~800nm , 其构造比较简单 , 测定的灵敏度和精密度较高 。 因此 , 应用比较广泛 。 721型分光光度计的仪器构造见下图 。
从光源灯发出的连续辐射光线 , 射到聚光透镜上 , 会聚后 , 再经过平面镜转角90° , 反射至入射狭缝 。 由此入射到单色器内 , 狭缝正好位于球面准直物镜的焦面上 , 当入射光线经过准直物镜反射后 , 就以一束平行光射向棱镜 。 光线进入棱镜后 , 进行色散 。 色散后回来的光线 , 再经过准直镜反射 , 就会聚在出光狭缝上 , 再通过聚光镜后进入比色皿 , 光线一部分被吸收 , 透过的光进入光电管 , 产生相应的光电流 , 经放大后在微安表上读出 。
分光光度计的使用方法
①首先接通电源 , 打开电源开关1 , 指示灯亮 , 打开比色皿暗箱盖8 , 预热20分钟 。
②波长选择旋钮6 , 选择所需的单色光波长 , 用灵敏度旋钮2选择所需的灵敏档 。
③放入比色皿 , 旋转零位旋钮5调零 , 将比色皿暗箱盖合上 , 推进比色皿拉杆3 , 使参比比色皿处于空白校正位置 , 使光电管见光 , 旋转透光率调节旋钮4 , 使微安表9指针准确处于100% 。 按上述方法连续几次调整零位和100%位 , 即可进行测定工作 。
分光光度计使用和维护中应注意事项:
①连续使用仪器的时间不应超过2小时 , 最好是间歇0.5小时后 , 再继续使用 。
②比色皿每次使用完毕后 , 要用去离子水洗净并倒置晾干后 , 存放在比色皿盒内 。 在日常使用中应注意保护比色皿的透光面 , 使其不受损坏或产生划痕 , 以免影响透光率 。
③仪器不能受潮 。 在日常使用中 , 应经常注意单色器上的防潮硅胶(在仪器的底部)是否变色 , 如硅胶的颜色已变红 , 应立即取出烘干或更换 。
④在托运或移动仪器时 , 应注意小心轻放 。
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