t载体 t载体克隆原理 _知识经验

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1、T载体又叫T质粒载体，是指T4噬菌体DNA连接酶，作用是在有Mg2 、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。
2、DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。
3、两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能，而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。
4、T4噬菌体DNA 连接酶催化DNA 连接反应分为3 步：首先，T4 DNA 连接酶与辅因子ATP形成酶-ATP复合物；然后，酶-ATP复合物再结合到具有5’磷酸基和3’羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最后产生一个新的磷酸二酯键，把切口封起来。
5、连接反应通常将两个不同大小的片断相连。
6、形象的说， DNA水解酶相当于剪刀，剪断DNA，而T载体（DNA连接酶）就相当于针线。
7、如果克隆时不用，就不能将DNA连接起来。
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