细胞培养步骤细胞培养步骤哪里确保无菌

【细胞培养步骤细胞培养步骤哪里确保无菌】

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1、一、复苏1.把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。
2、液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
3、2.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。
4、3.把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。
5、吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。
6、4.标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
7、5.3天换一次培养基。
8、二、传代1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
9、2.把原有培养基吸掉。
10、3.加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。
11、4.细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
12、5.用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。
13、6.把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
14、7.倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。
15、8.根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。
16、一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。
17、继续培养。
18、三、冻存把细胞消化下来并离心（同上）。
19、用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。
20、4℃ 30min ， -20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。
21、冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。
22、要注意的就是无菌操作！。
本文到此分享完毕，希望对大家有所帮助。

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