质粒拯救 质粒拯救的转化宿主有要求吗


质粒拯救 质粒拯救的转化宿主有要求吗

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大家好,小豆豆来为大家解答以上的问题 。质粒拯救的转化宿主有要求吗,质粒拯救这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!
1、质粒救援转化是质粒转化枯草杆菌特有的方法 。
2、在此转化中,质粒以单链形式进入感受态细胞的 。
3、单体质粒DNA和感受态细胞接触时 , 在核酸酶作用下被切开 , 只有一条DNA链能够进入细胞 。
4、这条链进入细胞后由于没有另外一条质粒DNA链迅速与其配对而被降解,所以没有转化活性 。
5、寡聚型的质粒DNA分子在进入感受态细胞以后,线性DNA分子中的同源部分进行分子内的重组 , 并环化生成一个完整的质粒分子,不会被分解而有转化活性;质粒中如果具有与枯草杆菌同源的部分,质粒单链DNA进入感受态后可以与同源的片段配对形成双链,保护质粒 。
6、所以可以通过:1构建寡聚型的质粒DNA分子(酶切后用连接酶连接);2在质粒中加入同源片段构建杂种质粒(质粒片段越大,转化效率越高 。
7、当然是在一定限度内) 。
【质粒拯救 质粒拯救的转化宿主有要求吗】8、这种转化方法称质粒救援转化 。
9、参考资料:枯草芽孢杆菌中的分子克隆和单体杂种质粒转化的研究陈乃用等应用于发酵工业的DNA重组技术 王贵宏等应用于基因筛选的穿梭质粒,弥补基因撞击或环境突变、提供基因剂量、促进基因操作,还可以应用于蛋白干扰分析 。
10、质粒拯救我也不熟悉,只知道是反向遗传的一种方法 。
11、具体的可以查看:利用8质粒系统拯救A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株禽流感病毒 石火英 微生物学报 2005/03 这篇文章有具体的例子 。
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