影响退火温度PCR反应特异性的重要因素 。
引物与模板复性所需的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度 。引物越短，引物中的引物越短G C含量越低，所需的退火温度越低 。虽然降低退火温度可能会增加产量的扩大，但引物与模板之间的不匹配也会增加，导致非特异性增加 。
【退火温度是影响PCR反应特异性的重要因素 退火温度的高低由什么因素决定】相反，虽然提高退火温度可以提高反应的特异性，但会降低扩展效率，甚至没有扩展产品 。引物的退火温度可以通过Tm=4(G C) 2(A T)公式组略估算，一般计算Tm降低5摄氏度的值非常适合反应设计退火温度 。

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