经验分享：基因治疗在眼科疾病研究中的应用及常见注射方式简介( 二 )

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图2前房注射
2.玻璃体腔注射
?实验前准备
麻醉小鼠：在小鼠称重后，经腹腔注射适量的1%戊巴bi妥钠溶液，放置于饲养笼内，等待麻醉约5-10min 。小鼠麻倒后，眼球表面滴入扩瞳剂使其散瞳。
?玻璃体腔注射
用微量注射器吸取适量病毒备用，取麻醉后的小鼠置于操作台上，眼部给予盐酸利多卡因进行局部麻醉，左手按住头部，使其眼球部分突出，右手持微量注射器自角膜后缘1mm位置插入玻璃体腔内，针尖先垂直进入，随后倾斜，慢慢推注病毒。病毒注射完毕，缓慢抽出针头。
?动物复苏
将小鼠放回饲养笼内，注意保温，待其苏醒。

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图3玻璃体注射
3.视网膜下注射
小鼠的后半眼球壁由内向外分为视网膜、脉络膜和巩膜。小鼠视网膜结构与人体类似（图4），注射具体操作步骤如下：

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图4C57BL小鼠视网膜组织HE染色图（400×）
?实验前准备
麻醉小鼠：在小鼠称重后，经腹腔注射适量的1%戊巴bi妥钠溶液，放置于饲养笼内，等待麻醉约5-10min 。小鼠麻倒后，眼球表面滴入扩瞳剂使其散瞳。
?病毒注射
用微量注射器吸取适量病毒备用，取麻醉后的小鼠置于操作台上，眼部给予盐酸利多卡因进行局部麻醉，左手按住头部，使其眼球部分突出，右手持微量注射器自角膜后缘1mm位置插入玻璃体腔，针尖先垂直进入，随后倾斜，直至对侧视网膜（经玻璃体腔注射），有阻力时停止进针，慢慢推注病毒。或者用注射器针头与眼轴呈15°角在动物暴露出的距角膜缘1-2mm处巩膜开一个扎破巩膜但不穿透RPE的通道，针头斜面没入即停止进针（经巩膜注射），慢慢推注病毒。病毒注射完毕，缓慢抽出针头。
?动物复苏
将小鼠放回饲养笼内，注意保温，待其苏醒。

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4.结膜下注射
结膜下注射是眼局部给药的常用方法。具体操作步骤如下
?实验前准备
麻醉小鼠，等待约5-10min ，滴入扩瞳剂。
?病毒注射
用微量注射器吸取适量病毒备用，取麻醉后的小鼠置于操作台上，眼部给予盐酸利多卡因进行局部麻醉，用镊子夹起结膜，沿结膜内侧刺入3-4mm ，可透过结膜观察到针头的走向，慢慢注射病毒，注射完毕，停留数秒拔针，注射后可见球结膜下有隆起，眼球突出。
?动物复苏
将小鼠放回饲养笼内，注意保温，待其苏醒。

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图6结膜下注射
来源赛业生物
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