1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中 ， 加等量含5～10IU/ml肝素的无血清缓冲液悬浮细胞 。 将细胞悬液小心加在与血液等量的淋巴细胞分离液上 ， 室温中 ， 水平离心500×g 20分钟 。 此时离心管中形成5层：最上面是血浆 ， 血浆层和淋巴细胞分离液之间是PBMC ， 淋巴细胞分离液层和最下面的红细胞层之间是粒细胞层 ， 又成为棕黃层 。
2．吸去最上层的血浆 ， 收集血浆层和淋巴细胞分离液交界面的单个核细胞 ， 尽量全部吸出PBMC 。 加1～2倍量含5IU/ml肝素、2％灭活小牛血清的Hanks液（洗涤液） ， 混匀后离心200×g 10分钟 ， 低速离心有利于去除细胞悬液中留存的血小板 ， 去上清液 。
3．再用同样洗涤液洗涤细胞2次 ， 每次离心500×g 10分钟 ， 洗去残留的淋巴细胞分离液 。 用1％台盼蓝染色检测细胞活力（应>95％）并计数细胞 。 再用含10％小牛血清的细胞培养液将细胞配成适当浓度 。 通常 ， 每毫升外周血可得1×106～2×106PBMC 。
分离关节滑液中的单个核细胞
1．将关节滑液置含肝素（终浓度5IU/ml）的离心管中 ， 离心1000×g 15分钟 。
2．用含2％灭活小牛血清的Hanks液悬浮沉淀细胞并洗涤细胞1次 ， 每次离心1000×g 15分钟 。 用含2％灭活小牛血清的Hanks液悬浮细胞至原容量 。
3．用淋巴细胞分离液分离关节滑液中的单个核细胞 ， 并用含10％小牛血清的细胞培养液将细胞配成适当浓度 。
分离组织中的单个核细胞
1．取外科分离的各种组织 ， 用含1％庆大霉素和1％小牛血清的MEM培养液洗涤组织块 ， 洗去可能的污染物 。 将组织块置培养皿中 ， 加入约为组织块体积5~10倍的同样MEM培养液 。 用无菌外科剪刀将组织块剪碎成0.5mm3大小 。
2．将组织块转移到小培养瓶中 ， 静置片刻 ， 吸去培养液 。 加入约2倍组织块体积的、滤过除菌的酶溶液 。 37℃水浴摇床中消化1～2小时 ， 注意组织块的消化程度 。
3．当组织块消化分散后 ， 用手用力摇晃培养瓶3～5分钟或用大口吸管反复吹打 ， 使细胞团进一步分散 。 加入30ml上述MEM培养液 ， 终止酶反应 。
4．让上述悬液通过200目的金属网或尼龙网 ， 分离单个细胞 。 用上述MEM培养液洗涤细胞3次 ， 每次离心1000×g 10分钟 。 用1％台盼蓝染色法检测细胞活力并计数细胞 。
5．如果细胞量较多（>107） ， 应当用上述淋巴细胞分离液分离出单个核细胞 ， 并用含10％小牛血清的细胞培养液将细胞配成适当浓度 。

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