细胞|《细胞》子刊：让叛徒巨噬细胞回炉重造，两种老药提供新抗癌思路！( 二 ) 编程|博士|叛徒|研究|Egeblad|肿

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患者提取TAM与MPLA及IFN-γ共孵育24小时后，各组M1型巨噬细胞（上图）及TAM（下图）标记物的相对基因表达比较
那么， MPLA+IFN-γ诱导TAM重编程为肿瘤免疫微环境带来了哪些变化呢？
研究人员在MMTV-PyMT-chOVA小鼠模型中考察了MPLA+IFN-γ对多种T细胞的影响。
结果发现，MPLA+IFN-γ不仅可以增加肿瘤内细胞毒性T细胞的总细胞数，其中被激活的细胞（CD8+PD1+），及记忆T细胞（CD44+CD62L-）的占比也显著升高。
说明 MPLA+IFN-γ可以逆转免疫抑制的肿瘤微环境，增加肿瘤中的细胞毒性T细胞浸润，并构建长久的后天免疫应答记忆。

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各类T细胞占比在各治疗组中的对比
同时，研究人员还发现，MPLA+IFN-γ依赖巨噬细胞作为中介来激活后天免疫应答， MPLA+IFN-γ单独与T细胞共孵育并不能激活T细胞。而且， MPLA+IFN-γ可以通过重编程巨噬细胞诱导多种趋化因子的释放，来招募免疫细胞。
此外， MPLA+IFN-γ还可以上调或抑制多种免疫通路相关基因的表达，激活I型IFN信号通路，从而进一步刺激免疫应答。
为了进一步挖掘TAM复极化与T细胞激活之间的直接连接枢纽，研究人员单独考察了MPLA+IFN-γ治疗后在巨噬细胞中表达升高的IL-12、TNFα、及CXCL9这三个细胞因子。
结果发现， CXCL9抗体不能抑制MPLA+IFN-γ治疗后细胞毒性T细胞的激活，但IL-12及TNFα中和抗体可以部分降低CD69+细胞毒性T细胞的占比。这说明巨噬细胞释放的IL-12及TNFα直接介导了T细胞的激活，但在这之外一定还有其他的机制与之相辅相成，一同促成了TAM与T细胞的交流。

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MPLA+IFN-γ诱导后， IL-12、TNFα、及CXCL9抗体对CD69+细胞毒性T细胞表达的抑制作用对比
总的来说， MPLA+IFN-γ疗法将TAM重编程为具有抗肿瘤活性的巨噬细胞，并通过细胞因子的释放间接诱导了细胞毒性T细胞的激活。那么，巨噬细胞与T细胞的强强联手，是否能够带来显著的抗肿瘤疗效呢？
Egeblad博士及其团队继续在PyMT小鼠模型，及另一种转移性乳腺癌4T1小鼠模型中进行了抑瘤实验。
令人激动的是，瘤内注射MPLA+IFN-γ后，不仅上述两种乳腺癌肿瘤的生长被显著抑制了，乳腺癌的肺部转移也得到了控制。实验中所有的对照组小鼠均出现了肺转移，而在MPLA+IFN-γ治疗组中只有2/5的PyMT小鼠及4/9的4T1小鼠出现了肺转移。

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A和B：瘤内注射MPLA及IFN-γ在PyMT及4T1模型中的抑瘤效果 (箭头表示给药)
C和D：各组肿瘤肺转移负荷对比（肺组织采样时间点为末次给药三天后）
研究人员也考察了经腹腔注射的给药途径，证明腹腔注射MPLA+IFN-γ也可以显著抑瘤。同时，腹腔注射的较高剂量并没有带来显著器官毒性，这从一定程度上说明了MPLA+IFN-γ疗法的安全性。
更值得一提的是，研究人员还将MPLA+IFN-γ疗法与前期报道过的几种针对TAM的抗肿瘤药物进行了横向比较，其中包含在表观遗传水平上诱导TAM复极化的HDAC抑制剂TMP195、以TAM复极化关键激酶为靶点的PI3Kγ抑制剂IPI-549、和集落刺激因子受体1（CSF1R）抑制剂PLX3397 。研究发现，MPLA+IFN-γ疗法较其他疗法能更加有效得抑制PyMT小鼠乳腺癌肿瘤的原位生长及肺部转移。