《Small》：骨肉瘤不可怕，化学-光热疗法协同近红外响应来帮忙( 二 )

·OH
和消耗GSH的优异能力，这使得其有望成为有效的癌症CDT 。

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图4羟基自由基(·OH)的催化生产和谷胱甘肽的消耗
HCFPNPs的体外细胞CDT/PTT治疗
首先，通过溶血试验和CCK8试验评估HCFPNPs的生物相容性。由图5A可知，不同浓度的HCFPNPs溶血率均在0.2%以下，说明浓度高达
100μgmL?1
的HCFPNPs具有良好的生物相容性，对红细胞膜无破坏作用。此外，还研究了HCFPNPs与HUVEC细胞孵育时的细胞生物相容性， HUVEC细胞活力均高于95% ，表明HCFPNPs具有良好的生物相容性（图5B）。通过流式细胞术研究了细胞凋亡，其中使用PI和膜联蛋白V-FITC对143b细胞进行染色，然后通过荧光激活细胞分选进行分析，结果表明由NIR产生的热引发的光热效应促进了Fenton过程以实现CDT/PTT协同治疗（图5C-D）。

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图5HCFP癌症的体外生物相容性和协同CDT/PTT
体外药物装载/释放
由于HCFP纳米粒子具有中空的介孔结构和PDA壳，对于药物的负载是有利的。 DOX是一种常用于OS化疗的药物，用于评估HCFP纳米粒的药物负载效率和pH响应性释放。随着DOX浓度的增加， 480nm处的特征吸收峰越来越明显，表明HCFP纳米粒子可以作为化疗药物的载体。高载药量可能与HCFP纳米粒子的多孔结构、强π-π堆积以及PDA壳层与DOX分子间的氢键作用有关（图6A-B）。此外，研究了37℃下DOX@HCFP纳米粒子在PBS溶液中的pH响应释放行为。如图6D所示， DOX@HCFPNPs释放的DOX表现为先突释，后持续释药。
此外， HCFP纳米颗粒可以进入细胞，用荧光显微镜研究了DOX@HCFP纳米粒子在143b细胞中的亚细胞定位和近红外光激发的药物释放行为。游离DOX在细胞核内显示强烈的红色荧光，这可能是由于小分子药物DOX可以通过简单扩散快速进入细胞的现象（图6E）。此外，还通过流式细胞术研究了DOX@HCFP纳米颗粒的细胞内DOX释放。流式细胞仪的检测结果与荧光显微镜的观察结果一致，表明加热可以促进DOX从DOX@HCFP纳米颗粒中的释放。因此，上述结果证实了基于HCFP纳米粒子的光热可以增强化疗药物在肿瘤细胞中的累积，从而促进化疗。

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图6药物装载/释放，细胞摄取和细胞活力
体内治疗效果
基于在体外优异的生物相容性和治疗效果，进一步评估了DOX@HCFPNPs对鼠中143bOS肿瘤异种移植物的体内组合CDT/PTT/化疗治疗性能。如图7A所示，各组小鼠体重均无明显变化，说明小鼠健康状况良好。与对照组(PBS)相比，在NIR照射下用DOX@HCFP治疗的组显示出肿瘤生长的完全抑制，这可能是由于CDT/PTT/化疗的联合作用。此外，对肿瘤切片进行组织学染色，以进一步确认不同治疗的疗效(图7D) 。 Ki67是与细胞增殖相关的抗原。 Ki67染色的图像显示，在用DOX@HCFP+NIR治疗的肿瘤中，细胞增殖Ki67蛋白的表达减少，证明CDT/PTT与化疗的组合可以导致癌症的增强治疗。 HE染色表明DOX@HCFP+NIR治疗组中的肿瘤组织出现显著的细胞坏死。此外，在每组的主要器官中没有明显的病理变化，表明在治疗期间对治疗的小鼠没有明显的副作用(图7E) 。

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图7体内抗肿瘤作用
综上，本文首次通过简单的溶剂热法成功构建了一种新型抗肿瘤纳米平台(DOX@HCFP) ，用于肿瘤CDT/PTT/化疗的联合治疗。在弱酸性条件下，制备好的DOX@HCFP释放出Fe3+、Cu2+和DOX等物质。释放出的Fe3+和Cu2+可以通过氧化还原反应产生Fenton剂， Fe2+和Cu2+降低GSH水平，进一步催化H2O2产生毒性·OH用于GSH-depletion增强CDT 。此外， HCFPNPs表现出优异的光热效应，不仅能进一步提高CDT效率，还能促进DOX的释放。体外和体内实验结果均表明， DOX@HCFP具有良好的抗肿瘤作用。因此，该纳米催化平台为OS的CDT/PTT/化疗提供了一个很有前景的候选平台。