经验分享：悬浮细胞中生产 AAV 载体细胞培养工艺开发简介( 四 ) _健康小知识

在驯化过程中，我们发现避免非常高的细胞密度很重要，因为这会导致聚集现象。一般来说，我们将细胞密度维持在2.5×106个细胞/mL以下。细胞聚集体可能会降低转染效率并导致在放大生产规模中出现问题。重要的是，我们还确认了HEK293细胞也可以在具有类似的性能的HyCell?TransFx-H培养基中驯化和培养。由于SV40大T抗原的存在，我们讨论了AAV生产的HEK293T细胞在法规上的可接受性。因此在许多情况下应首选HEK293细胞。
我们在ReadyToProcessWAVE?25中放大了rAAV5材料的生产规模，产生了高病毒滴度和高百分比的完整衣壳，而且工艺可放大并非常可靠。对生产rAAV5的rAAV2转染方案进行了验证，可以达到如下质粒纯化最佳标准：qPCR≥1×1013VG/LELISA≥1×1014VP/L完整衣壳百分比≥10%
在这些条件下完全符合rAAV5收获材料的所有标准。
因此，我们认为本文描述的优化转染方案适用于多种AAV血清型，并且可以放大到生产临床级AAV载体所需的体积。尽管我们在本文中描述的是针对AAV2和AAV5的优化，但该策略也已成功用于AAV8和AAV9（目前正在进行中）（来源思拓凡）返回搜狐，查看更多
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