经验分享：溶瘤病毒作为治疗肿瘤新疗法的探讨( 二 )

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图2溶瘤病毒靶向肿瘤的分子机制
3溶瘤病毒的基因改造
近几年，国内外针对溶瘤病毒的基因改造也逐渐形成主流趋势。主要原因为单纯的溶瘤病毒对杀伤肿瘤细胞的针对性和有效性不够稳定，有些溶瘤病毒减弱了感染肿瘤细胞的专一性，不仅对肿瘤细胞进行攻击，也对一些正常的细胞进行感染和杀伤，继而导致了溶瘤病毒在治疗肿瘤方面的局限性和负面性。此外，单纯的溶瘤病毒作用发挥主要以直接对肿瘤细胞进行感染、在细胞内复制并最终裂解细胞，也可通过提呈肿瘤抗原激活抗肿瘤免疫应答，但由于肿瘤微环境中存在着严密的免疫抑制网络，所起到的抗肿瘤免疫作用并没有发挥到最佳状态。针对以上原因，对溶瘤病毒进行基因改造是提高溶瘤病毒感染杀伤肿瘤细胞的精准性、提高治疗肿瘤实效性以及有效地激活由溶瘤病毒引起的抗肿瘤免疫应答的有效途径。
3.1溶瘤病毒针对肿瘤细胞靶向性的基因改造
溶瘤病毒针对肿瘤细胞靶向性的基因改造一般采取几种方法，其主要方法是敲除病毒在正常细胞中复制所必需的基因，使其在正常细胞中丧失复制能力；也可利用肿瘤细胞中某些信号通路异常来实现，例如在许多肿瘤细胞中p53和pRB信号通路表达异常，而在正常细胞中p53和pRB信号均较高水平表达且功能正常，因此溶瘤病毒可以利用肿瘤细胞和正常细胞的差异来特异性靶向肿瘤细胞[21] 。此外，还有其他利用基因改造获得特异性靶向肿瘤的途径，如利用端粒酶为靶点的溶瘤作用、利用溶瘤病毒上TK基因敲除来靶向肿瘤细胞、利用肿瘤细胞异常增殖相关的酶及代谢产物靶向肿瘤细胞以及在病毒基因组中插入特异性的启动子来调控病毒复制周期所必需的基因表达以将病毒复制限定在肿瘤细胞中。
3.2溶瘤病毒搭载抗肿瘤细胞因子的基因改造
溶瘤病毒搭载抗肿瘤细胞因子不仅发挥直接杀伤肿瘤细胞和激活抗肿瘤免疫应答的作用并且能够有效地分泌加载的细胞因子到肿瘤微环境中，实现改变肿瘤微环境的目的。例如，溶瘤病毒表达的IL-24可有效抑制小鼠体内乳腺癌细胞生长并诱导肿瘤细胞凋亡。溶瘤病毒搭载GM-CSF(如T-VEC和Pexa-Vec)或其他免疫刺激基因能够有效地在动物模型和人体内诱导抗肿瘤免疫应答。此外，一些溶瘤病毒表达细胞因子(如IL-2、IL-12、IL-18)、趋化因子(如CCL5、CCL7)或共刺激因子(如B7H1和CD40L)等，在小鼠模型和临床患者治疗中被证实能够起到有效的抗肿瘤作用。溶瘤病毒除了搭载免疫相关基因外也可结合其他的免疫疗法提升整体的治疗效果，其与组蛋白去乙酰化酶抑制剂合用可抑制固有免疫应答并瞬时促进溶瘤病毒的感染和蔓延，显著增强抗肿瘤免疫效果、提高治疗指数。
4溶瘤病毒细胞载体
虽为一种新型治疗肿瘤的方法，大多数的溶瘤病毒制剂尚未应用于临床，其主要原因是，对于一些非实体瘤而言大多采取静脉注射溶瘤病毒的方式进行治疗，其进入体内会引起机体自身的抗病毒免疫反应，被抗体阻断或被补体蛋白溶解。而在实体瘤中，静脉注射给药不能使其很好地到达肿瘤病灶，只有少数的溶瘤病毒被运输到肿瘤位置发挥作用。
针对溶瘤病毒不能有效到达肿瘤发生部位的情况，一般采取对溶瘤病毒进行包装，使用细胞载体作为其到达肿瘤发生部位的载体。细胞载体作为溶瘤病毒的“诺亚方舟”可使溶瘤病毒有效地逃避免疫监视系统，且两者联合具有更好的抗肿瘤效果，如肿瘤浸润淋巴细胞(tumorinfiltratinglymphocyte ， TIL)和细胞因子诱导的杀伤细胞等，这是由于机体自身的免疫细胞能够避免免疫排斥反应，并且能向肿瘤细胞浸润，是运输溶瘤病毒的有效方式。