硼中子俘获治疗联合放射疗法( 二 ) BNCT联合放射疗法研究机构已广

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将与聚碳酸酯箔接触的硅标准NIST2137中的10B植入物暴露于中子注量下。这种能量密度足够低，可以避免核迹线重叠，从而可能危害单个计数。中子辐照后，将箔片暴露于UV-C辐射5分钟或30分钟，然后进行化学蚀刻。作为参考，将这些箔与无UV-C暴露条件进行了比较。最后，获得了核径迹的显微照片，并按《成像与分析》中的详细说明进行了分析。
用光学显微镜与CCD相机耦合获得显微照片。设置光照条件以获得最佳质量和可再现的图像。
为了量化放射自显影图像的JING迹密度，必须识别并计数核径迹。使用软件ImageProPremier?进行了图像分析过程9.2 。首先将基于阈值的图像分割应用于每个灰度图像。然后，基于手动选择的参考对象的学习分类方法被应用，以区分核径迹坑与在分割过程中获得的其他对象。先前已经研究了与区分核径迹有关的多个参数，包括面积，圆形度和纵横比，用于训练算法。进行了培训，以测量用户手动选择的几个对象中的这些参数。通过将结果与手动计数进行比较来验证此过程。

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为了保证细胞在聚碳酸酯上的附着力，硼中子俘获治疗研究机构首先测试了不同的预处理条件。选择PBS条件进行预处理，因为与对照样品相比,它对细胞附着和生长或形态的影响可忽略不计。其他策略导致明显的细胞死亡或异质生长。该固定方案实现了良好的细胞结构维护和质量。
建立细胞附着和固定方案后，使用苏木精染色进行细胞印迹形成实验。观察到使用苏木精染色改变蚀刻和UV-C曝光时间的效果。第一列显示在暴露于UV-C之前用苏木精染色5分钟的细胞培养物。其他两列显示在不同蚀刻时间分别为2分钟和4分钟的第一列中描绘的同一区域的细胞印迹。连同蚀刻时间变化，与UV-C曝光时间相对应的图片显示在不同的行中：15、30、60和120分钟。
在UV-C照射之前使用苏木精可以使细胞核与其他细胞区分开来。印记会在原始染色的细胞图像中复制发现。将蚀刻时间从2分钟增加到4分钟会导致对比度增强，并在Lexan箔片上记录“更清洁”的图像。众所周知，较长的蚀刻时间会产生较大的核径迹，从而使核径迹与细胞痕迹更好地区分开。关于UV-C照射，随着曝光时间增加，特别是30分钟或更长时间，可以观察到更加恶化的细胞印迹。这可能会损害突出细胞结构的能力。此外，减少曝光时间对于轨道可视化至关重要。
考虑到先前的结果，然后通过将染色时间增加到15分钟来研究2、5和15分钟的照射时间。作为对照样品，将一组Lexan箔片暴露于UV-C辐射，而无需苏木精染色。正如硼中子俘获治疗研究机构先前的工作所确定的那样，细胞结构以不同的水平吸收UV-C辐射，从而在蚀刻的检测器表面产生浮雕。第一列中值得注意的是，细胞印迹是由每个细胞结构的UV-C吸收形成的。此外，通过将染色时间设置为15分钟，可以注意到印记中的细胞结构在所有曝光时间内均具有更大的对比度。对于建议的分析，在5分钟和15分钟内获得的结果在细胞SHI鉴定方面没有显着差异。期望通过减少曝光时间来减少轨道褪色，硼中子俘获治疗研究机构放弃了15分钟的UV-C 。另一方面，尽管在2分钟的曝光下产生的细胞印迹可以接受，但在5分钟的曝光时间下，细胞印迹的图像对比度似乎对于清晰识别结构而言是最佳的。