高压均质对紫贻贝水解液分散稳定性的影响( 二 )

2.4多肽浓度测定
在不同处理条件下，以4℃离心力4000×g离心15min ，保存不同时间，收集上清液进行多肽浓度测定。上清液中的多肽含量用Watters的方法测定，但稍加修改。具体地说，制备了含有1.5g五水合硫酸铜、6g酒石酸钠脱水和300mL10%氢氧化钠的缩二脲试剂，然后将去离子水加入体积为1000mL的体积中生成Watters试剂。
2.5离心式沉淀率测定
按Hu等人的方法测定了样品的离心沉淀率(R) 。将样品转移到80mL离心管中，在4℃下以4000×g离心15min ，通过倒置离心管排出上清液，并用滤纸仔细干燥沉淀物以去除残留溶液。分别在离心前后准确测定单独离心管重量和有样品或沉淀物离心管重量。离心沉淀率(R)计算如下：

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式中， Wp是总的离心沉淀物加上离心管重量(以克为单位) ， Wt是只有离心管的重量，而Ws是样品加离心管的总克重量。
2.6浊度保留率测定
在相同的位置从液面上取样品，离心(4000×g ， 15min) ，以避免样品不均匀导致的浊度差异。在660nm处测量吸光度，并根据以下方程计算浊度保留率(T)：

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式中， COD和SOD分别表示存储的离心上清液和初始状态浊度。
2.7荧光光谱观测
用于分析多肽结构变化的本征荧光通常以色氨酸(Trp)为代表。样品用蒸馏水稀释15倍至3mL ，然后使用日立-2700型光谱荧光光度计(日立，日本东京)进行分析。激发波长为290nm ，激发和发射狭缝为5nm 。发射波长范围为260nm~320nm 。测量是在25℃下进行的。
2.8颗粒大小和Zeta电位的测定
使用ZetaSizer3000HSA激光粒度仪(英国伍斯特郡马尔文仪器)测定PHM和PHMX溶液的粒度和Zeta电位。样品用1：5的磷酸盐缓冲液稀释，以避免多次散射。 Zeta电位是在25℃下测量的。用强度分布(Di)表征了PHM和PHMX中多肽和黄原胶在贮藏过程中平均粒径分布的变化。
2.9扫描电子显微镜观察
用扫描电子显微镜(JSM-7800F ， JEOL ，日本东京)观察了PHM和PHMX的微观结构。在10KV的加速电压下，更详细地观察了多肽和黄原胶颗粒在样品中的分布形态。在观察之前，样品被临界点干燥，微粒在Ar气氛中溅射出2nm的金。
2.10统计分析
本文采用单因素重复测量实验设计。在相同的条件下，对这些值进行三次单独的测试，并进行三份样本分析。所有数据均以平均数±标准差表示。为了评估相关性，进行了皮尔逊相关性检验。用最小二乘差法比较各处理间的平均值，并在P<0.05处建立显著性。用SPSS12软件包(泰国曼谷SPSS泰国有限公司)进行方差分析，并分析变量之间的差异。
3结果与讨论
3.1HPH对多肽在PHM中溶解度的影响
我们分析了PHM在储存过程中多肽沉淀率的变化和PHM的物理稳定性(表1) 。通过测定离心后总可沉降物的百分比来分析PHM的沉降情况。由于颗粒的沉降，该参数的值越大， PHM的稳定性就越低。与PHMX系统相比，均质PHMX系统中的多肽在储存60d后表现出最好的分散稳定性，且多肽的沉淀率变化不大(P<005) 。具体来说， PHMX储存60天的离心沉淀率最高(图1) ，而PHM+HPH组的离心沉淀率最低。由于在PHMX样品中加入黄原胶，多肽和黄原胶不均一就不能形成稳定的结构，导致黄原胶大量析出。均相样品(PHM+HPh和PHMX+HPh)的浊度保留率显著高于未经处理的样品(PhM和PhmX) ，表明HPh预处理显著提高了多肽体系的分散稳定性。这一结果可能归因于HPH增加了多肽的溶解度，减小了多肽和/或黄原胶的颗粒尺寸，导致了HPH后PHMX形成致密而均匀的凝胶网络(表2) 。这种致密、均匀的微观结构有助于提高体系的分散稳定性。类似地， Wu等人报道说，增加多肽的溶解度和减小颗粒尺寸可以提高持水率，这有利于体系的稳定性。