前列腺特异性膜抗原是前列腺癌新辅助强化雄激素剥夺治疗后残留疾病的生物标志物( 二 ) _健康小知识

切除后，对根治性前列腺切除术标本进行粗略检查，然后根据标准程序对福尔马林固定和石蜡包埋。将五微米连续的组织切片安装在带电载玻片上进行染色或直接用于RNA的回收。福尔马林固定和石蜡包埋的载玻片使用标准方案用H&E染色。如前所述，对治疗病例的残留肿瘤进行定量。 10,11抗PSMAIHC使用DakM3620在1：500稀释下进行。补充材料（https://www.jurology.com）中提供了实验室方法的更多详细信息。
手动图像分析
将3mm×3mm网格覆盖在每个组织切片上，以将组织划分为方形感兴趣区域（ROI）进行分析。使用HALO?图像分析平台（新墨西哥州阿尔伯克基的IndicaLabs）进行网格划分。每个区域都通过PSMA染色和该区域的肿瘤存在进行分类，使用每个ROI中染色或未染色的上皮的总面积对每个网格进行单独分类，不包括腔腔空间。如果ROI内的大部分肿瘤PSMA呈阳性，并且大多数阳性是肿瘤，则该区域被归类为“真阳性” 。如果ROI内的大部分肿瘤PSMA为阴性，或者如果阴性染色肿瘤多于阳性染色的非肿瘤，则该区域被归类为“假阴性” 。如果一个区域的大部分染色阳性是非肿瘤的，则该区域被归类为“假阳性” 。如果一个区域内没有肿瘤或染色阳性，则将其归类为“真阴性” 。 ROI的分类由董事会认证的专家前列腺病理学家（R.T.L.）验证。用于自动图像分析的方法在补充材料（https://www.jurology.com）中提供。
统计分析
使用Mac的GraphPadPrism版本9（GraphPadSoftware ，加利福尼亚州圣地亚哥）进行统计分析，使用Pearson或Spearman相关性测量因子之间的关联。使用Welch的t检验对治疗和未治疗的肿瘤之间，肿瘤和非肿瘤区域之间或ER和INR病例之间的单一因素进行比较。使用2侧Fisher的精确检验对已治疗或未治疗的肿瘤与个体二分法因素之间的富集进行零假设检验。使用Cochran-Armitage测试进行已治疗和未治疗肿瘤之间单一因素内协变量的比较。 PSMAIHC用于区分INR和ER病例的准确性使用接收器工作特性曲线进行检查。统计学显著性在p<0.05处预先指定。对于已治疗和未治疗的病例，报告了基于网格的检测性能，置信区间为95% ，通过随机抽样置换患者的2 ， 000个自举样本的2.5%和97.5%百分位数获得。补充材料（https://www.jurology.com）中提供了RNA-seq分析的详细方法。
结果
针对PSMA的IHC可识别新辅助iADT后的残留肿瘤
作为2期临床试验的一部分，我们在35名患者的队列中评估了6个月的全身性新辅助iADT后前列腺切除术标本中残留肿瘤的存在。 10虽然H&E染色通常足以检测患者的大部分残留腺癌，但在一小部分病例中进行了抗NKX3.1或PIN-4鸡尾酒（高分子量细胞角蛋白， p63和α-甲基酰基-CoA消旋酶）的IHC ，用于检测单个肿瘤细胞并精确计算治疗后肿瘤体积。 11常见的前列腺癌标志物前列腺特异性抗原（PSA）和AR在一部分病例中由于iADT抑制AR而显示染色减少（图1 ， A和B），因此在这种治疗后环境中没有那么有用。在许多情况下，滑索标志物NKX3.1的弥漫性染色鉴定出残留肿瘤（图1 ， A）。在几乎所有情况下，使用PSMA抗体进行免疫染色都显示出残留肿瘤的强而一致的染色（图1 ， A和B）。在这些治疗后肿瘤中，抗PSMAIHC在良性腺体中较弱（图1 ， C）。相比之下，来自未接受ADT治疗的患者的前列腺切除术标本在良性和肿瘤腺中均显示出更强的PSMA染色（图1 ， D）。

文章图片
图1.前列腺肿瘤的代表性全玻片和插入显微照片。 A、抗PSMA残留肿瘤阳性，抗PSA阴性，抗NKX阳性3.1 。 B ，抗PSMA残留肿瘤阳性，抗AR弥漫性弱。 C ，显示的良性腺体区域与PSMA阳性残留肿瘤细胞相邻的抗PSMA阴性。 D ，未经治疗的前列腺切除组织，良性（顶部）和肿瘤（底部）腺体均染色阳性，以抗PSMA 。显示H&E以供参考。全幻灯片图像条：5毫米;插入条：100μm 。