Hydromer亲水涂层具有降低血栓形成性、细胞增殖和蛋白质吸附性( 四 )

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图3
图3：未涂覆和双相t8b涂层电抛光不锈钢上的血细胞的免疫组化分析。从柠檬酸盐的人全血中制备的富血小板血浆在室温下在不锈钢表面孵育3小时。红细胞和白细胞的方法和检测是按照“材料和方法”中所述，使用针对各种细胞表面蛋白的特异性抗体来确定的。
如图3所示，使用该方法很容易检测到粒细胞（CD15）和红细胞（CD235），而淋巴细胞（CD18）处于或低于检测限。粒细胞和红细胞在t8b涂层不锈钢上的粘附率分别降低了86%和60% 。同时，我们还检测了HUVEC细胞对电抛光不锈钢的增殖情况。暴露于细胞3天后，将不锈钢切片用PBS冲洗，并放入含有培养基的新板的孔中。加入细胞增殖试剂（50lL），在378C下3h后分析平板。

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图4
图4.人脐静脉内皮细胞（HUVEC）在未涂布和双T8B涂层电抛光不锈钢上的增殖情况。 HUVEC被接种到12孔板中，该板上包含未涂层(B)或涂有t8b涂层配方(C).培养3天后，取出切片，冲洗，然后与1mL培养基一起放入12孔板的新孔中。加入细胞增殖试剂（50lL）， 378C孵育3h 。取等分物（100lL），在492nm处测定细胞增殖(A).的吸光度这些数据从四个独立的实验中结合起来，并归一化为未涂覆的对照组（p＜0.0001）。显微镜检查时间为3100例。
与对照组相比， Dualityt8b涂层不锈钢的细胞增殖显著减少（p＜0.001）[图4(A)] 。通过对不锈钢切片的显微镜检查，证实了细胞增殖的减少。与未涂层的不锈钢相比，涂层不锈钢的表面几乎没有细胞[图4(C)][图4(B)] 。当在378C的PBS或HUVEC培养基中培养多达3周时，该涂层都能有效地减少HUVEC的增殖（数据未显示）。
通过评估富集血小板制剂或柠檬酸全血在管内孵育3小时后血小板和红细胞与管腔的粘附情况，评估涂在聚氨酯管表面的配方的血栓形成潜力。利用对表面蛋白CD41和CD235的抗体，也完成了对这些细胞的粘附情况的评估。

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图5
图5：血小板和红细胞与T8B涂层聚氨酯管的粘附。在聚氨酯管（2cm长）的管腔内填充血小板悬浮液或全血，并在室温下孵育3小时。然后用PBS清洗试管，并使用针对CD41和CD235的抗体进行检测，如“材料和方法”中所述。
如图5所示，未涂有的聚氨酯管表面容易检测到血小板和红细胞粘附，而涂有DualityTMT8B的管表面的粘附明显减少。显微镜检查证实了粘附力的减少（未显示）。

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图6
图6：血浆蛋白和溶菌酶对未涂层和双相t8b涂层不锈钢的吸附。离心从正常柠檬酸人全血中分离血浆，与对照(A)或t8b涂层不锈钢(B)在室温下孵育18h 。在相同条件下使用溶菌酶溶液（4mg/mL）溶液，使用对照(C)和T8b涂层(D)不锈钢。底物用PBS冲洗，考马斯亮蓝染色（3500）
图6中的数据表明， DualityTMT8B配方可以显著降低蛋白质的吸附。与DualityTMt8b涂层不锈钢相比，血浆蛋白的吸附对控制未涂层不锈钢[图6(A)]显著[图6(B)] 。此外，高浓度的溶菌酶（4mg/mL）对控制未涂层的不锈钢也有显著的吸附作用[图6(C)] ，当使用dualitytmt8b涂层材料进行测试时，这也几乎不存在[图6(D)] 。
为了确定这种粘附减少是否能在长时间暴露于生物液体后持续存在，全血使用蠕动泵以2mL/min的流速循环长达12天。白天在室温下泵送血液，然后在48摄氏度下保存过夜，每24小时更换一次血液。在12天结束时，清洗试管的管腔，用考马斯亮蓝染色，并用光镜检查。