细胞|JITC：香港中文大学于君团队发现胃癌免疫治疗新靶点( 二 ) 基因|组织|生存率|患者|肿瘤

文章图片

YTHDF1敲降可抑制胃癌细胞株增殖
A：western blot证实细胞株中YTHDF1基因敲降效果
B：YTHDF1基因敲降后对胃癌细胞活力的影响
C：YTHDF1基因敲降后对胃癌细胞集落形成能力的影响
以上体外实验结果表明， YTHDF1有明显的促癌作用。为了探索YTHDF1在体内是否也有同样的促癌作用，研究人员分别将转染空白质粒的MKN74细胞（MKN74-shNC）和敲降YTHDF1表达的两个稳转细胞系MKN74-shYTHDF1-1和MKN74-shYTHDF1-2分别接种到小鼠皮下。
结果显示，与接种MKN74-shNC的小鼠相比，接种MKN74-shYTHDF1-1和MKN74-shYTHDF1-2的小鼠，皮下肿瘤的大小和重量均明显减小。这一结论在接种转染空白质粒的YTN16-sgNC细胞和YTHDF1基因敲除（YTN16-sgYTHDF1-1和YTN16-sgYTHDF1-2）细胞的小鼠中得到了进一步验证。

文章图片

小鼠皮下成瘤实验
D：NSG小鼠接种MKN74细胞和YTHDF1低表达细胞对皮下成瘤的影响
E：NSG小鼠接种YTN16细胞和YTHDF1低表达细胞对皮下成瘤的影响
体内外实验均表明， YTHDF1可明显促进胃癌细胞的增殖，为了明确其发生的相关分子机制，研究人员进一步对YTN16-sgNC细胞和YTHDF1基因敲除细胞进行了RNA测序。
分析显示，在YTHDF1基因敲除细胞中，有575个基因表达上调， 866个基因表达下调。基因富集分析揭示了YTHDF1基因敲除细胞中免疫调节途径基因的缺失，包括CTLA-4检查点通路和CD209 DC通路。同时，研究人员使用KEGG数据库进行基因富集分析时发现，在YTHDF1基因敲除细胞中JAK-STAT信号通路基因表达上调， T细胞受体信号通路基因表达下调。这些结果提示， YTHDF1可能在体内发挥免疫调节作用。
接下来，为了探索YTHDF1的促癌作用是否依赖于免疫系统，研究团队使用了具有免疫活性的同源小鼠模型C57BL/6小鼠，在其皮下分别接种YTN16-sgNC细胞和YTHDF1基因敲除细胞。在整个持续6周的实验过程中，接种YTN16-sgNC细胞的小鼠肿瘤持续增长，接种YTHDF1基因敲除细胞的小鼠在接种1周后皮下虽均有肿瘤长出，但接种YTN16-sgYTHDF1-1的小鼠皮下肿瘤在2周后开始逐渐缩小。这说明YTHDF1的促癌作用至少部分依赖于功能正常的免疫系统。
2周后，肿瘤体积变化情况
既然在免疫系统正常的情况下， YTHDF1基因敲除可加快小鼠皮下肿瘤的消除，研究人员猜想肿瘤中的YTHDF1是否能在体内调节抗肿瘤免疫呢？于是，他们在C57BL/6小鼠身上分别接种YTN16-sgNC细胞和YTHDF1基因敲除细胞，并在2周后收集肿瘤，通过流式细胞术检测肿瘤微环境中的免疫细胞浸润情况。
结果显示，与接种YTN16-sgNC细胞相比，接种YTHDF1基因敲除细胞的小鼠肿瘤大小和重量都有明显的减少。流式细胞仪分析显示， YTHDF1基因敲除组的肿瘤组织中浸润性免疫细胞（CD45+细胞）的比例明显高于YTN16-sgNC组（P<0.05）。

文章图片

在同源小鼠模型中， YTHDF1缺失可诱导肿瘤消除并增加免疫细胞浸润
众所周知， T细胞（CD3+淋巴细胞）是适应性肿瘤免疫的重要组成部分，于是，研究人员进一步分析了C57BL/6小鼠肿瘤组织中T淋巴细胞的浸润情况。结果显示， YTHDF1基因敲除组肿瘤组织中， CD3+细胞和CD45+细胞比例显著高于YTN16-sgNC组，且在浸润性免疫细胞中， CD4+T细胞和CD8+T细胞数量和占比也均高于YTN16-sgNC组。