经验分享：注意！质粒中的内毒素，或可影响细胞转染效率！ _健康小知识

转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法中脂质体转染方法较为常用；生物介导方法现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。

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什么是内毒素？
细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（LipopolySaccharide,LPS）和蛋白的复合物，当细菌裂解时便会大量释放出来。内毒素单位为EU 。
内毒素对试验的影响
内毒素存在极大程度地影响转染效率。同时内毒素还可能激活免疫细胞的非特异反应，造成实验中的假阳性。因此，为了保证高转染率和转染细胞高存活率，必须从质粒制备的过程中将内毒素去除。
内毒素和质粒的关系
由于内毒素两亲性和负电荷性，性质类似于DNA ，因此在质粒纯化中会伴随质粒一同被纯化出来。质粒中内毒素含量的高低常用EU/μg质粒表示。
按照EU/μg大小，质粒被分为三个级别：测序级别（>50EU/μg）、转染级别(<50EU/μg)和无内毒素级别(<0.1EU/μg) 。

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再次强调
当你提取的质粒DNA是为了转染原代细胞、悬浮细胞或者敏感细胞；进行基因沉默研究、细胞注射显微操作；进行基因治疗或者DNA疫苗等要求极为严格的实验，就应该考虑Endotoxin-Free的质粒。
2017年3月，张锋课题组在《NatureProtocols》发表的《Genome-scaleCRISPR-Cas9knockoutandtranscriptionalactivationscreening》中， Endotoxin-Free的质粒获得被列为CriticalStep ，同时推荐该厂家的NucleoBondEndotoxinFreePlasmidDNAkit ，可避免病毒包装和细胞培养过程中减少了内毒素残留的影响。

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NucleoBondEndotoxinFreePlasmidDNAkit
来自有着近百年滤纸技术和近60年色谱技术的德国MN（MACHEREY-NAGEL）。采用阴离子交换树脂技术作为质粒纯化的原理。
推荐原因：
内毒素低于0.05EU/ug
Endotoxin-Free系列设计有**的Endo-EF内毒素去除试剂，有效去除内毒素，避免了长时间的氯化铯超速离心步骤，也不需要冰上孵育30min ，内毒素含量远远低于市面上同类产品。
得率高
采用MAE作为阴离子交换树脂填料，与传统的DEAE材料（二乙氨乙基）相比，亲水性质的羟基（-OH）替代了疏水性质的甲基（-CH3），更小的分子量可以使每克树脂可结合更多的质粒DNA ，得率可达1000μg 。
DEAE:Diethylaminoethyl（二乙氨乙基）

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MAE:Methylaminoethanol（甲基乙醇胺）

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超螺旋结构保护好
滤纸和色谱技术相结合诞生的NucleoBondXtraColumn实现裂解液重力过滤和过柱，无需离心，减少了离心力对质粒超螺旋结构的影响。

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裂解后的质粒状态（泳道1）和洗脱下来的质粒状态（泳道4）是保持一致的。
抽提速度更快
NucleoBondXtraColumn实现过滤和质粒结合树脂的步骤合二为一，避免较长时间的离心。 NucleoBondFinalizer实现过柱后的溶液通过一个针管过滤器，质粒就可以吸附在过滤器中的介质上，仅需要5min即可以完成之前长达1h的异丙醇质粒离心沉淀操作！

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来源基因科技有限公司返回搜狐，查看更多